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親和層析中的蛋白洗脫

更新時(shí)間:2022-01-27 點(diǎn)擊次數(shù):2940

親和層析是根據(jù)一種生物分子間的特異相互作用來(lái)分離物質(zhì)的層析方法,利用待分離物質(zhì)與配體間所具有的特異性親和力來(lái)達(dá)到分離目的的一類特殊層析技術(shù)。如抗原與抗體、DNA與RNA、酶與底物或抑制物等。

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從親和層析填料上洗脫結(jié)合靶標(biāo)是結(jié)合的可逆過(guò)程,需優(yōu)化條件,削弱靶標(biāo)和配基之間的相互作用。洗脫條件不應(yīng)使靶蛋白變性,除非這些條件與下游程序兼容。

有兩種類型的洗脫方法,即特異性洗脫和非特異性洗脫。

特異性洗脫過(guò)程中,介質(zhì)或競(jìng)爭(zhēng)配基或競(jìng)爭(zhēng)靶標(biāo),通過(guò)這種形式攻擊蛋白質(zhì)-配基復(fù)合物,繼而將靶蛋白釋放至溶液中。用于洗脫的競(jìng)爭(zhēng)介質(zhì)的濃度和量(體積)依賴于其親和力,這種親和力與固定復(fù)合物的親和力相關(guān)。與親和力強(qiáng)的添加物相比,競(jìng)爭(zhēng)介質(zhì)的結(jié)合越弱越需要更高的濃度和更大的體積。對(duì)于弱的競(jìng)爭(zhēng)介質(zhì),比配基高10倍是較好的濃度起點(diǎn)。特異性洗脫通常是溫和的,更可能保留蛋白質(zhì)的活性。這種方法的缺點(diǎn)在于:洗脫慢、洗脫峰寬、需要從回收的蛋白質(zhì)中去除競(jìng)爭(zhēng)介質(zhì)。

對(duì)于非特異性洗脫,需根據(jù)配基與蛋白質(zhì)之間的相互作用機(jī)制優(yōu)化洗脫條件,如增加鹽濃度、降低離子相互作用或通過(guò)改變pH來(lái)改變質(zhì)子化/離子化狀態(tài),從而調(diào)節(jié)氫鍵強(qiáng)度、疏水相互作用及靜電相互作用。從固定的Protein G上洗脫抗體就是一個(gè)改變pH的例子,然而Protein G與抗體的親和力非常強(qiáng),需要不同洗脫條件組合達(dá)到zui大程度的抗體釋放。通常,親和作用需要靶蛋白正確地三維折疊,因此離液劑或影響蛋白質(zhì)折疊的試劑可用于洗脫目標(biāo)蛋白質(zhì),但是,必須注意保證靶標(biāo)的正確折疊在洗脫后迅速恢復(fù)天然條件。當(dāng)親和力弱時(shí),高濃度靶分子結(jié)合后,通過(guò)稀釋以解離、洗脫復(fù)合物。


月旭科技可提供的親和層析填料


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? Protein G Tanrose 4FF抗體親和介質(zhì)

? Ni Tanrose 6FF(NTA/IDA)/Ni Tanrose 6HP(NTA)/Ni Tanrose 4FF(NTA/IDA)金屬螯合親和介質(zhì)

? Co Tanrose 6FF(NTA)金屬螯合親和介質(zhì)

? IMAC Tanrose 6FF/Chelating Tanrose 6FF金屬螯合親和介質(zhì)

? Benzamidine Tanrose 4FF苯甲脒親和介質(zhì)

? GST Tanrose 4FF谷胱甘肽親和介質(zhì)

? Heparin Tanrose 6FF/Heparin Tanrose 6HP肝素親和介質(zhì)

? Endotoxin rem Tanrose 4FF內(nèi)毒素親和填料

? NHS-activiated Tanrose 4FF/CNBr-activiated Tanrose 4FF預(yù)活化親和填料


月旭科技可提供預(yù)裝柱供您選擇


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